乳制品中三聚氰胺的液相色譜檢測(cè)法

  乳制品中三聚氰胺的液相色譜檢測(cè)法
  三聚氰胺（Melamine）是一種重要的三嗪類含氮雜環(huán)化工原料，主要用于生產(chǎn)三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛用于木材加工、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革等行業(yè)，為白色晶體。三鹿奶粉引發(fā)了對(duì)三聚氰胺檢測(cè)的廣泛關(guān)注，質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局和標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)相繼發(fā)布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè) 液相色譜法》（GB/T22400-2008）的標(biāo)準(zhǔn)。本文參考了以上標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行配制條件優(yōu)化，建立了乳制品中三聚氰胺的液相色譜檢測(cè)法，前處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)限、精密度、重現(xiàn)性以及回收率均合標(biāo)準(zhǔn)。

  1   實(shí)驗(yàn)部分
  1.1 儀器與試劑
  501-HPLC液相色譜儀（含UV501紫外-可見檢測(cè)器1臺(tái)，P501高壓恒流泵1臺(tái)，杭州賽析科技有限公司）；DT-230A色譜柱溫箱；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；TGL-16G-A離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(>99%，上海安譜)；辛烷磺酸鈉(色譜純，北京百靈威)；磷酸(分析純)、乙腈(色譜純，美國Tedia)、純凈水(杭州娃哈哈)。
  1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制
  精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，溶于50％的甲醇水溶液，配制稱1.422mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃避光保存。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
  1.3 樣品前處理
  稱取2g酸奶樣品與50ml具塞離心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混勻后聲提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l鹽酸750ul，混勻，以12000r/min離心5min，取上清液，0.22um濾膜過濾，作為HPLC測(cè)定溶液。
  1.4 色譜條件：
  色譜柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
  流動(dòng)相：乙腈/緩沖鹽=15/85（緩沖鹽：10mM辛烷磺酸鈉水溶液，含0.1％磷酸）
  流速：1.0ml/min
  波長(zhǎng)：240nm
  溫度：40℃
  進(jìn)樣量：20μl

  2   實(shí)驗(yàn)結(jié)果
  2.1 精密度實(shí)驗(yàn)
  取濃度為0.569μg/ml三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，以各成分峰面積計(jì)算RSD(%)，所得結(jié)果如表1所示：保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.23％，峰面積RSD為0.57％。
                                                         表1 精密度實(shí)驗(yàn)

. Retention time（min） Peak High Peak Area
1 11..8
2 11..2
3 11..0
4 11..8
5 11..6
RSD(%) 0.23 0.82 0.57

                                  圖1 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品

  2.2   標(biāo)準(zhǔn)曲線
  配置濃度分別為0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液。將以上6種標(biāo)準(zhǔn)工作液在上述色譜條件下按濃度由高進(jìn)樣。用小二乘法以對(duì)照品濃度(橫坐標(biāo)X軸，µg/ ml)對(duì)峰面積(縱坐標(biāo)Y軸)進(jìn)行線性回歸，求算標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  2.2   加樣回收率和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)
取已知三聚氰胺含量的酸奶樣品，加入量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，按“樣品前處理” 操作，平行制備3份，得到樣品溶液后按上述色譜條件進(jìn)樣分析，得到加樣回收率及重現(xiàn)性結(jié)果，見表2。 Spiked(mg/kg) Recovery(%) RSD(%)
35.0 87.2 1.37

                                圖2 空白酸奶樣品

                                   圖3 加酸奶樣品

  2.2   檢測(cè)限及定量限
  依據(jù)噪聲值，按3倍信噪比，計(jì)算其理論檢出限，為0.221 mg/kg；按10倍信噪比，計(jì)算其定量限，為0.738 mg/kg。
 
  3  結(jié)論
  本方法優(yōu)化了液相色譜法檢測(cè)乳制品中三聚氰胺測(cè)定方法，該方法簡(jiǎn)化了前處理步驟，易于操作，線性關(guān)系良好，有較好的精密度和重現(xiàn)性，回收率滿足標(biāo)準(zhǔn)的要求，檢出限和定量限也合目前三聚氰胺的檢測(cè)要求。
  相關(guān)資料：飼料中三聚氰胺液相色譜儀