酶聯(lián)免疫檢測儀(ELISA Reader)是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器.可簡單地

　　分為半自動和全自動2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其都是一個比色計,即用

　　比色法來分析原或體的含量. ELISA測定一般要求測試液的終體積在250u l以下,用

　　一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計有要求.

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗方法

　　酶標(biāo)朕免疫吸附試驗方法簡稱酶標(biāo)法,是標(biāo)記技中的一種,是從熒光體技,同位素

　　免疫技發(fā)展而來的一種敏感,特異,快速并且能自動化的現(xiàn)代技.

　　酶標(biāo)法的基本原理是將原或體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)原或體, 此酶標(biāo)原或

　　體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)原或體發(fā)生特異反應(yīng),并牢固地結(jié)合形成仍保持的

　　免疫復(fù)合物.當(dāng)加入相應(yīng)底物時,底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色.顏色深淺與相應(yīng)原

　　或體含量成正比.

　　由于此技是建立在原-體反應(yīng)和酶的催化作用的基礎(chǔ)上,因此,具有高度的靈

　　敏性和特異性,是一種富生命力的免疫學(xué)試驗技.

酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)

　　酶標(biāo)儀實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)

　　和光電比色計基本相同.

　　圖示是一種單通道自動進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器

　　變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透

　　過標(biāo)本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)

　　的電信號.電信號經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理

　　和計算,后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.

　　微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動來移動微孔板,從而實

　　現(xiàn)自動進(jìn)樣檢測過程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進(jìn)行檢測,因此省去了X,Y

　　方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡單.

　　微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的

　　小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的原或體,微孔板上每個小孔可盛放點幾毫升的溶液.其常見

　　規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對其可進(jìn)行一孔

　　一孔地檢測或一排一排地檢測.

　　酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計相同的單色器來得

　　到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在

　　微孔板的后面,其效果是相同的.下圖便是目前常用的酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)圖.光源燈發(fā)出的光經(jīng)

　　聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90o反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到

　　光電管.

　　從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出,它和普通的光電比色計有以下幾點差異:

　　(l)盛裝待測比色液的容器使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的

　　聚乙烯材料制成,對原體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體.

　　(2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光來都

　　是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液.

　　(3)酶標(biāo)儀通常不用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度.

　　酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器

　　有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu),可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試,手動型則

　　靠手工移動微孔板來進(jìn)行測量.

　　在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo),此類酶標(biāo)一般都是自動化型的.它沒

　　有多個光束和多個光電檢測器,如 12個通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個光源,12個檢測

　　器和12個放大器,在X方向的機(jī)械驅(qū)動裝置的作用下,樣品12個為一排被檢測.多通道酶標(biāo)

　　儀的檢測速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價格也較高.

　　摘自《陜學(xué)檢驗》1998.13(4)12

　　摘要 為酶標(biāo)儀檢測結(jié)果的室內(nèi)重復(fù)性和增強(qiáng)室間可比性，對已建立的酶標(biāo)儀性能評價與鑒定的基本方法進(jìn)行了詳細(xì)解釋和補(bǔ)充，以供同行在評價、鑒定儀器時參考與應(yīng)用。

酶標(biāo)儀的使用注意事項

　　1、工作環(huán)境

　　酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不能其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。根據(jù)DINVDE0871條例，儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635－19條例：

　　儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。

　　為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。

　　操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃－40℃之間，環(huán)境濕度在15％－85％之間。

　　操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。

　　操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。

　　保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及的操作空間。

　　2、操作注意事項

　　酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大，在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣，會造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項：

　　使用加液器加液，加液頭不能混用。

　　洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。

　　嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時間準(zhǔn)確。

　　在測量過程中，請勿碰酶標(biāo)板，以酶標(biāo)板傳送時擠傷操作人員的手。

　　請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請洗手。

　　如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請嚴(yán)格按照試

　　劑盒的操作說明，以對操作人員造成損害。

　　如果儀器接觸過污染性或物品，請進(jìn)行清洗和。

　　不要在測量過程中關(guān)閉電源。

　　對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以效果。

　　使用后蓋好塵罩。

　　出現(xiàn)技故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。

酶標(biāo)儀及洗板機(jī)選購指南

酶標(biāo)儀（MicroplateReader）是對酶聯(lián)免疫檢測（EIA）實驗結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在原或體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測體或原的濃度。

　　酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時了生殖健康技水平。

　　目前國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶測項目，如：乙肝五項、愛滋病檢測、優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法，報出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對照品的OD值×2.5，通過目測無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否過另一孔顏色的2.5倍就不可能。

　　國內(nèi)多家機(jī)構(gòu)，如檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀測定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變（如：、愛滋病、優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院病人前的丙肝、愛滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的事故糾紛的要手段，正逐漸被許多單位所采用。

　　我國免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發(fā)光，在市場上的情況如下：

　　方法所處市場周期

　　放免衰退期

　　酶免成長期

　　發(fā)光進(jìn)入期

　　放免技由于試劑的污染和期等問題在國際和國內(nèi)市場逐漸被淘汰，而化學(xué)發(fā)光試劑和設(shè)備比較昂貴，使得其在國內(nèi)的普及在計生系統(tǒng)普及需要較長時間，EIA技穩(wěn)定，試劑價格合理，供應(yīng)充，酶免技在中國市場處于成長期，因此購買酶標(biāo)儀正合適宜。

　　尤其要提到的是，在中國的計劃生育和婦幼保健系統(tǒng)配備酶標(biāo)儀已經(jīng)迫在眉睫。早在幾年以前,世界衛(wèi)生組織已建議對孕婦進(jìn)行TORCH 五項常規(guī)篩查，但是遺憾的是由于缺乏酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等設(shè)備，RCH的檢測在中國還未能普遍開展。TORCH感染在圍產(chǎn)中稱為TORCH，由于孕婦,胎兒和兒都易被感染,它已受到婦產(chǎn)科和兒科的大重視。

　　妊娠期感染不危害母體，往往還可對胎兒和兒產(chǎn)生嚴(yán)重影響。通過可引起內(nèi)感染而導(dǎo)致流產(chǎn)、、胎或胎兒生長遲緩和畸形，通過產(chǎn)道和母乳可引起兒感染。如累及經(jīng)系統(tǒng)可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰ORCH感染與優(yōu)育有為重要的關(guān)系。因此，RCH（IgG和gM）檢查通常也稱為優(yōu)育十項檢查。目前，TORCH的檢測方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由于放免方法需要儀器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特異，靈敏度高，簡單快速，成本低等優(yōu)點，只要配備有酶標(biāo)儀和其他相應(yīng)的設(shè)備，多數(shù)普通實驗室均可方便地開展。很顯然,盡快在計生系統(tǒng)普及酶標(biāo)儀等設(shè)備是一個迫切的需求。

　　這項工作的落實將有助于水平，降低母嬰，從而整個國民的健康素質(zhì)。目前市場上提供的EIA試劑越來越多，如：T3、 T4、TSH、TORCH系列、系列、各種癥標(biāo)志物、傷寒、副傷寒等，另外通過母嬰傳播的性傳播(如、、HIV)和（如HBV、 HCV)，以及胎兒的體，兒TSH的測定，疫苗反應(yīng)等，市場上也都有成套EIA試劑盒供應(yīng)。使用酶標(biāo)儀有利于拓展檢測項目，檢測水平，其社會效益和經(jīng)濟(jì)效益并舉。

酶標(biāo)儀的應(yīng)用范圍

　　分類 項目名稱 簡　稱

　　血液學(xué)檢驗 血小板相關(guān)體的檢驗 PAIgA、PAIgG、PAIgM

　　D-二聚體的測定 D-Dimer

　　血清纖維蛋白降解產(chǎn)物的測定 FDP

　　三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸測定 T3、T4

　　免疫學(xué)檢驗 C反應(yīng)蛋白的測定 CRP

　　免疫球蛋白的測定 IgD、IgE

　　循環(huán)免疫復(fù)合物的測定 CIC

　　因子的測定 IgG、IgA、IgM類RF

　　甲狀腺球蛋白體、微粒體體的測定 TG、TM

　　腫免疫學(xué)檢測 甲胎蛋白的測定 AFP

　　胚原的測定 CEA

　　特異原的測定 PSA

　　胰、膽道、的測定 CA19-9

　　的測定 CA125

　　乳的測定 CA15-3

　　宮頸鱗的測定 SCC

　　多發(fā)性骨髓的測定

　　的測定 hTG

　　免疫學(xué)檢驗 甲肝血清學(xué)的檢測 H-IgM

　　乙肝血清學(xué)的檢測 兩對半

　　丙肝血清學(xué)的檢測 H-IgG、HCV-IgM

　　丁肝血清學(xué)的檢測 HDV-IgG、HDV-IgM

　　戊肝血清學(xué)的檢測 HEV-IgG

　　腎出血熱類體的檢測 HFRS-IgG

　　乙型體的檢測 IgM

　　免疫缺陷體（即區(qū)滋?。┑臋z測 HIV　β 2 M

　　優(yōu)育功能檢測 弓形蟲（體）的檢測 TOXO

　　風(fēng)疹的檢測 RV

　　細(xì)胞的檢測 CMV

　　單純的檢測 HSV（Ⅰ、Ⅱ）

　　其　它 本儀器還可做基因檢驗及獸殘、農(nóng)殘檢驗項目等