隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的檢測(cè)
“GB/T5750.12-2006和US-EPA Methods 162/1623”
EPA1623（GB/T5750.12-2006）兩蟲檢測(cè)方法的操作簡(jiǎn)介：
“EPA1623方法”是由美國(guó)局制定的用于測(cè)定水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的標(biāo)準(zhǔn)方法。概括地說(shuō),該方法分為三部。，對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾收集水中的卵囊和孢囊；第二，利用免疫磁分離來(lái)純化過(guò)濾樣品；第三，對(duì)純化的樣品通過(guò)免疫熒光顯微鏡法來(lái)檢測(cè)“兩蟲”的數(shù)量。
1．水樣過(guò)濾:
采用美國(guó)EPA和國(guó)標(biāo)5750中推薦的Envirochek囊式濾器對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，將卵囊、孢囊及其他物質(zhì)收集在過(guò)濾器上。該過(guò)濾器可用于實(shí)驗(yàn)室批量水樣的過(guò)濾，也可以用于野外現(xiàn)場(chǎng)水樣的過(guò)濾。過(guò)濾后的囊式濾器，用洗脫劑將攔截在濾囊上的顆粒物質(zhì)震蕩洗脫下來(lái)，并將洗脫物收集在一個(gè)250毫升的離心管中。
2．免疫磁分離：
離心管中的洗脫物通過(guò)離心分離作用，使顆粒物沉淀在離心管底部，同時(shí)去掉離心管中的上清液。
將離心后含有卵囊和孢囊的沉淀物用純水混勻，并向其中加入的免疫磁分離試劑進(jìn)行磁分離。具體做法是：先用帶有體（隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲）的磁珠捕獲沉淀物中的卵囊和孢囊；其次通過(guò)磁粒濃縮器將捕獲有卵囊和孢囊的磁珠吸附在試管壁上，去掉未被吸附在試管壁上含雜質(zhì)的液體，以卵囊和孢囊從沉淀物中分離出來(lái)的目的；再次加入鹽酸將管壁上捕獲有卵囊和孢囊的磁珠進(jìn)行洗滌，以使卵囊和孢囊從磁珠上解離出來(lái)；后將含有卵囊和孢囊的純化液轉(zhuǎn)移至井形載玻片上進(jìn)行制片。
3.IFA 染色&鏡檢：
待井形載玻片上的純化液干后，用NaOH中和井形載玻片上樣品，再用免疫熒光染色試劑盒，將卵囊和孢囊在井形載玻片上用磁熒光標(biāo)記的單克隆體和DAPI溶液著色后，蓋上蓋玻片。然后用正置熒光和顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè)。觀察樣片，對(duì)合卵囊和孢囊大小、外形、熒光特性的對(duì)象進(jìn)行定性、定量分析。
兩蟲檢測(cè)中Envirochek囊式過(guò)濾器介紹：
水樣過(guò)濾采用圖2所示的方式將囊式濾器安裝好，過(guò)濾完的濾囊用圖4所示的多臂震蕩器進(jìn)行洗脫分離。
特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn):
EPA1623方法推薦產(chǎn)品；國(guó)標(biāo)5750方法1。
1um孔徑的改良濾膜能100%截留兩蟲。
性使用的一對(duì)一設(shè)計(jì)避免了因其它因素的污染而造成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差。
簡(jiǎn)單的安裝與拆卸省時(shí)省物，并且可以現(xiàn)場(chǎng)采樣、異地檢測(cè)。
配合多臂洗脫震蕩器，實(shí)現(xiàn)多樣品檢測(cè)，大大節(jié)省人力和時(shí)間。
于源水（50升）與自來(lái)水（1000升）的隱孢子蟲與賈第鞭毛蟲的濃縮與回收，使用簡(jiǎn)單、方便、快捷，自動(dòng)化程度高。
隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的純化
—免疫磁分離技術(shù)—
1999年美國(guó)署在EPA1623方法中規(guī)定利用IMS(Immuo Magnetic Separation)免疫磁分離技術(shù)Dynabeads攀分選檢測(cè)飲用水中隱孢子蟲卵囊和賈第鞭毛蟲孢囊，其原理是：利用帶有特異性體的磁珠與樣品中的目標(biāo)產(chǎn)物G/C特異性原相結(jié)合，在磁場(chǎng)中選擇性分離。
研究型正置熒光生物顯微鏡系統(tǒng)：
本實(shí)驗(yàn)中所配備的熒光生物顯微鏡可以很好地完成明場(chǎng)和暗場(chǎng)顯微觀察，具有良好的性、穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用等特性。
顯微鏡數(shù)碼照相部分所配備的數(shù)碼照相機(jī)，為應(yīng)用的高清晰度數(shù)碼相機(jī)，采用不同于民用的圖像數(shù)據(jù)采集體及系統(tǒng)，此款相機(jī)成像可1200萬(wàn)像素級(jí)別，并且在適用明場(chǎng)拍攝的同時(shí)可以、穩(wěn)定地完成熒光圖象、暗場(chǎng)等拍攝的要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)圖像數(shù)據(jù)的記錄、再現(xiàn)和分析提供了很好的可能和保障；該相機(jī)的相關(guān)系統(tǒng)是目前應(yīng)用比較普遍、性能比較的；如出現(xiàn)問(wèn)題也方便修理和更換配件。配備微機(jī)及彩色打印系統(tǒng)效果。
“GB/T5750.12-2006和US-EPA Methods 162/1623”
EPA1623（GB/T5750.12-2006）兩蟲檢測(cè)方法的操作簡(jiǎn)介：
“EPA1623方法”是由美國(guó)局制定的用于測(cè)定水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的標(biāo)準(zhǔn)方法。概括地說(shuō),該方法分為三部。，對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾收集水中的卵囊和孢囊；第二，利用免疫磁分離來(lái)純化過(guò)濾樣品；第三，對(duì)純化的樣品通過(guò)免疫熒光顯微鏡法來(lái)檢測(cè)“兩蟲”的數(shù)量。
1．水樣過(guò)濾:
采用美國(guó)EPA和國(guó)標(biāo)5750中推薦的Envirochek囊式濾器對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，將卵囊、孢囊及其他物質(zhì)收集在過(guò)濾器上。該過(guò)濾器可用于實(shí)驗(yàn)室批量水樣的過(guò)濾，也可以用于野外現(xiàn)場(chǎng)水樣的過(guò)濾。過(guò)濾后的囊式濾器，用洗脫劑將攔截在濾囊上的顆粒物質(zhì)震蕩洗脫下來(lái)，并將洗脫物收集在一個(gè)250毫升的離心管中。
2．免疫磁分離：
離心管中的洗脫物通過(guò)離心分離作用，使顆粒物沉淀在離心管底部，同時(shí)去掉離心管中的上清液。
將離心后含有卵囊和孢囊的沉淀物用純水混勻，并向其中加入的免疫磁分離試劑進(jìn)行磁分離。具體做法是：先用帶有體（隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲）的磁珠捕獲沉淀物中的卵囊和孢囊；其次通過(guò)磁粒濃縮器將捕獲有卵囊和孢囊的磁珠吸附在試管壁上，去掉未被吸附在試管壁上含雜質(zhì)的液體，以卵囊和孢囊從沉淀物中分離出來(lái)的目的；再次加入鹽酸將管壁上捕獲有卵囊和孢囊的磁珠進(jìn)行洗滌，以使卵囊和孢囊從磁珠上解離出來(lái)；后將含有卵囊和孢囊的純化液轉(zhuǎn)移至井形載玻片上進(jìn)行制片。
3.IFA 染色&鏡檢：
待井形載玻片上的純化液干后，用NaOH中和井形載玻片上樣品，再用免疫熒光染色試劑盒，將卵囊和孢囊在井形載玻片上用磁熒光標(biāo)記的單克隆體和DAPI溶液著色后，蓋上蓋玻片。然后用正置熒光和顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè)。觀察樣片，對(duì)合卵囊和孢囊大小、外形、熒光特性的對(duì)象進(jìn)行定性、定量分析。
兩蟲檢測(cè)中Envirochek囊式過(guò)濾器介紹：
水樣過(guò)濾采用圖2所示的方式將囊式濾器安裝好，過(guò)濾完的濾囊用圖4所示的多臂震蕩器進(jìn)行洗脫分離。
特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn):
EPA1623方法推薦產(chǎn)品；國(guó)標(biāo)5750方法1。
1um孔徑的改良濾膜能100%截留兩蟲。
性使用的一對(duì)一設(shè)計(jì)避免了因其它因素的污染而造成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差。
簡(jiǎn)單的安裝與拆卸省時(shí)省物，并且可以現(xiàn)場(chǎng)采樣、異地檢測(cè)。
配合多臂洗脫震蕩器，實(shí)現(xiàn)多樣品檢測(cè)，大大節(jié)省人力和時(shí)間。
于源水（50升）與自來(lái)水（1000升）的隱孢子蟲與賈第鞭毛蟲的濃縮與回收，使用簡(jiǎn)單、方便、快捷，自動(dòng)化程度高。
隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的純化
—免疫磁分離技術(shù)—
1999年美國(guó)署在EPA1623方法中規(guī)定利用IMS(Immuo Magnetic Separation)免疫磁分離技術(shù)Dynabeads攀分選檢測(cè)飲用水中隱孢子蟲卵囊和賈第鞭毛蟲孢囊，其原理是：利用帶有特異性體的磁珠與樣品中的目標(biāo)產(chǎn)物G/C特異性原相結(jié)合，在磁場(chǎng)中選擇性分離。
研究型正置熒光生物顯微鏡系統(tǒng)：
本實(shí)驗(yàn)中所配備的熒光生物顯微鏡可以很好地完成明場(chǎng)和暗場(chǎng)顯微觀察，具有良好的性、穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用等特性。
顯微鏡數(shù)碼照相部分所配備的數(shù)碼照相機(jī)，為應(yīng)用的高清晰度數(shù)碼相機(jī)，采用不同于民用的圖像數(shù)據(jù)采集體及系統(tǒng)，此款相機(jī)成像可1200萬(wàn)像素級(jí)別，并且在適用明場(chǎng)拍攝的同時(shí)可以、穩(wěn)定地完成熒光圖象、暗場(chǎng)等拍攝的要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)圖像數(shù)據(jù)的記錄、再現(xiàn)和分析提供了很好的可能和保障；該相機(jī)的相關(guān)系統(tǒng)是目前應(yīng)用比較普遍、性能比較的；如出現(xiàn)問(wèn)題也方便修理和更換配件。配備微機(jī)及彩色打印系統(tǒng)效果。
