河豚毒素ELISA試劑盒
貨號：Ounuo97001

 
河豚毒素ELISA試劑盒，本品采用競爭性酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)用于鲀魚類肌肉、肝臟、皮膚等樣本中河豚毒素的定量分析，可滿足96次測試，在做復(fù)孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。

一、樣本前處理：

一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，如長時間不用，建議分裝成適量小份于-20或-80℃保存，請勿使用反復(fù)凍融的樣本。【注釋：廢棄的陽性樣本應(yīng)作為有毒廢棄物處理】

準(zhǔn)備

(1) 樣本提取液

        分別量取甲醇40mL、蒸餾水60mL、冰乙酸0.1mL混勻。

 (2) 1×樣本稀釋液

     按1份體積4×樣本稀釋液和3份體積的蒸餾水混勻。

 魚肉、肝臟、魚皮

(1) 稱取2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋30s;

(2) 放置于90℃水浴中10min，期間手搖樣本3次；

(3) 自來水降溫1min，加入1mL正己烷渦旋30s；4000rpm，離心5min；

(4) 取中間層清液100μL，加入300μL 1×樣本稀釋液混勻，取50μL點(diǎn)樣

稀釋倍數(shù)：20
二、檢測步驟（河豚毒素ELISA試劑盒）

檢測前準(zhǔn)備

1.所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;

2. 檢測開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；

3. 取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；

4. 未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；

5. 請不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測失??；

6. 標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。

洗液（1×）配制

取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻

三、檢測步驟（河豚毒素ELISA試劑盒）

(1) 移取50μL河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；

(2) 移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；

(3) 移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；

(4) 加入50μL河豚毒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；

(5) 室溫（20-25℃）孵育30min；

(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；

(7) 加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育15min;

(8) 加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)

四、結(jié)果計(jì)算

（1）以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。

其中公式如下

logit(B/B0)=k ln?〖(concentration)+c〗①

B為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對應(yīng)的吸光度；

B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度；

logit(B/B0)=〖ln(〗?〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;

K為斜率；

C為截距

（2）計(jì)算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度