辣度辣椒素檢測試劑盒（貨號：Ounuo97002）

辣度辣椒素檢測試劑盒, 采用競爭性酶免檢測技術(shù)用于辣椒及其制品辣度的定量分析，可滿足96次測試，在做復(fù)孔的情況下，一次可檢測42個樣本。

產(chǎn)品特性：

1) 快速（＜10min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法

2) 檢測限1度辣度，定量限2度辣度

3) 快速，檢測時間30min

4) 高的重現(xiàn)性

原理：
辣度辣椒素檢測試劑盒,基于競爭性免疫檢測原理：辣椒素與預(yù)包被在板上的辣椒素蛋白偶聯(lián)物競爭結(jié)合有限的抗辣椒素的抗體，然后加入酶結(jié)合物反應(yīng)，形成酶結(jié)合物—抗辣椒素抗體—辣椒素蛋白偶聯(lián)物復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，經(jīng)TMB底物顯色產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，加終止液后，產(chǎn)物由藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，其在450nm下有顯著吸收峰。樣本中辣椒素含量與樣本的吸光度呈負相關(guān)。 

1.樣本前處理準(zhǔn)備

(1) 樣本提取液      

分別取甲醇70mL和二甲基亞砜 30mL混勻備用。

(2) 1×樣本稀釋液      

取4×樣本稀釋液1份，加入3份去離子水混勻，比如1mL+3mL    

辣椒油、火鍋底料

火鍋底料、凝固性油樣，可以加熱至樣品溶化后再稱量

(1) 稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;

(2) 4000rpm，離心5min；

(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；

(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻

(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻

稀釋倍數(shù)：1

干辣椒  

粉碎后，過40目篩

(1) 稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;

(2) 4000rpm，離心5min；

(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；

(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻

(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻

稀釋倍數(shù)：1

新鮮辣椒以及辣椒醬等辣椒制品    

在均質(zhì)器或料理機上均質(zhì)呈勻漿

(1) 稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;

(2) 4000rpm，離心5min；

(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；

(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻

(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻

稀釋倍數(shù)：1

2. 檢測步驟檢測前準(zhǔn)備

• 所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;

• 檢測開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；

• 取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；

• 未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；

• 請不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測失?。?/p>

• 標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。

洗液（1×）配制

取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻 

檢測步驟（辣度辣椒素檢測試劑盒）

移取50μL辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；

移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；

移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；

加入50μL辣椒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；

室溫（20-25℃）孵育20min；

甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；

加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育10min;

加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)。 

3. 結(jié)果計算

(1)以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進行線性擬合。

其中公式如下a. logit(B/B0)=k ln?〖(concentration)+c〗①

b. B為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對應(yīng)的吸光度；

c. B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度；logit(B/B0)=〖ln(〗?〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;

d. K為斜率；

e. C為截距

(2)計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度；辣度換算公式【求得的濃度C樣，（C樣×1.142）/10，即為樣本的辣度】